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種子TEZ (TTC, TZ)染色法:    

     各例: | 胡瓜 | 大豆 | 蘿蔔 | 一串紅 | 黑麥草 | 高粱 | | 玉米 |

 

一般方法

1.工具:刀片、鑷子。

2.設備:立體顯微鏡、恆溫箱

3.藥劑:

緩衝液:(1) 9.0708g 的KH2PO4 溶於1000ml水中;(2) 11.876g的 Na2HPO4·2H2O 溶於1000ml水中。兩份(1)加上三份 (2)即可,調整為pH7。
 

TEZ溶液:2,3,5-triphenyl tetrazolium chloride(氯化三苯基四唑),以緩衝液配置0.5% 的TEZ溶液,裝於褐色瓶中備用。

4.本法分三步驟:
(1)種子吸濕及前處理,使藥劑容易滲入細胞,
(2)染色,
(3)直接或露胚來判斷染色結果。

5.種子吸水:
有些可以浸水,有些則需慢慢吸水,如大豆、高粱;
加速種子吸收TEZ的方法如割切 、去殼、真空處理等。

6.種子切割後至染色研判前,種子不得乾燥失水,特別在顯微鏡下觀查時。

7.研判:
(1)注意重要部位的染色結果,
(2)注意染色色澤,異常色澤如半透明狀為死組織;染色深暗可能的原因,是細胞受傷或染色過度應區分,
(3)無染色原因,可能是細胞已死或是因藥劑尚未滲透到該處,應區分。

8.下列種子不適於使用本法:
(1)因遺傳的關係種子本身衰弱,則雖是活種子但可能染色不佳。
(2)種子內部感染微生物。
(3)胚部本身顏色深,則雖是死種子但也可能被誤為活種子。

9.研判標準的建立:
首先確立TEZ的染色最適方法與程序,再將單粒染色結果歸成若干(如10至20)類型,然後取無休眠種子樣品多批(15批以上),每批進行800粒種子的標準發芽率試驗及400粒種子的TEZ測定,將TEZ測定結果按前述訂出的類別歸類。全部樣品作完後進行統計分析(例如root mean square法),將所有類型分成活的及死的兩項。 (以一串紅為例)